太难了总结 第1篇

为确定 WB 上信号的缺失是由于磷酸化效率低还是磷酸化蛋白分离不充分，同时需要检测总蛋白含量。例如，使用配对抗体检测磷酸化和未修饰的蛋白。

采用 PDGF（50 ng/mL）处理小鼠 3T3 细胞 0～60 min。通过 SDS-PAGE 在 凝胶上分离全细胞裂解物的总蛋白，转移至 PVDF 并在 5% 的 TBST 溶解的脱脂奶粉溶液中封闭。分别用含 2 μg/mL 抗 AKT1（NBP2 - 01725）和 2 μg/mL 抗 pS473 AKT1（NB100 - 56749）抗体检测。用化学发光法检测显示信号。

为定量检测磷酸化蛋白，荧光蛋白印迹法不妨一试。双色检测方法可以同时检测相同印迹上的两种抗原，这里用两个不同种属的荧光偶联二抗同时显示磷酸化蛋白和总蛋白（不同颜色），而无需剥离/重新检测印迹或运行单独的凝胶，称为 multiplexing。这种方法使得量化更为准确。

总之，磷酸化蛋白的 WB 与非磷酸化蛋白基本相似，但在样品制备过程中必须谨慎操作，避免去磷酸化。Bio-Techne 旗下的两大抗体品牌 R&D Systems® 和 Novus Biologicals® 可提供 1,000 多种用于 WB 检测的磷酸化抗体，扫描二维码，咨询当地经销商，了解更多磷酸化抗体。

此外，磷酸化蛋白检测的方法还有夹心法 ELISA、流式细胞术、ICC/IHC、固相抗体芯片等，应根据实验设计及实际情况选择合适的检测手段（Table 1）。

太难了总结 第2篇

其中第一模块「实验助手」，从 ELISA、WB、IHC/ICC、Luminex、3D 细胞培养及类器官研究等热门实验出发，梳理实验过程中需要注意的问题和相关解决方案，帮助大家少走弯路、技能进阶。

●第一期

时间：4 月 21 日 16:00～17:00

主题：ELISA 成功记：性能与操作缺一不可

●第二期

时间：4 月 28 日 16:00～17:00

主题：IHC/ICC 二三事：细节决定染色成败

●第三期

时间：5 月 5 日 16:00～17:00

主题：Western blot（WB）面面观：技术要点及解决方案

●第四期

时间：5 月 12 日 16:00～17:00

主题：Luminex 蛋白多因子检测技术：原理、流程及应用

●第五期

时间：5 月 19 日 16:00～17:00

主题：3D 培养和类器官实验技巧及常见问题

除以上直播外，后续我们还将推出第二模块：前沿应用；第三模块：大师讲堂，持续为您输送干货，敬请期待～

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太难了总结 第3篇

这一年，实体经济越发艰难，大量企业倒闭。疫情防控常态化，但餐饮业始终没有缓过劲来。旅游业仍然半死不活，零星病例就能让其全盘崩溃。

3月份香奈儿宣布停产，爱马仕和劳力士也宣布停产，4月份全国企业清算同比飙升超过23%。6月份维密直接破产，星巴克永久关闭400家连锁门店，贤合庄永久关闭270家连锁门店。国产“女装巨头”、“中国ZARA”拉夏贝尔也被债权人申请破产。xxx的 《云南映像》舞团解散，截至6月底之前，共有46万家公司倒闭。4月26号，上海某企业老板xxx，为了从隔离区出来到办公室用U盾给员工发工资，骑行40公里，穿越3个区。让我们看到疫情之下企业的担当。如果你的公司还在，你还能领到足够的工资。那你一定要珍惜当下！这一年，老板们都不容易。每一个活下来的企业，都是这个国家的功臣。

知乎上：“疫情以来，你觉得最大的改变是什么？”最高赞的答案只有七个字：钱越来越难挣了！每一年都说是就业的最难一年，今年更难。

2022年高校毕业生人数首次突破千万，就业形势比历年更加严峻。灵活就业人员增至2亿。考研人数突破457万。考公人数创历史最高记录。

有多少人因为疫情被隔离在家，又有多少人为了房贷、车贷，信用卡而焦虑。有多少人生意难以为继，不得不离开打拼多年的城市。又有多少人拿着少得可怜的工资却不敢辞职，不敢跳槽。

竞争之下，我们要抗争的可能更多是自己面对这个世界的无力感。以及让自己面对突如其来的变故，迅速复盘的能力。

从今年上半年的热播剧《亲爱的小孩》到《加油妈妈》，到底是谁在贩卖育儿的焦虑。

面对愈发艰难的2022，我们开始思考，我们到底未来是要培养什么样的孩子？所有内卷，皆是内耗。

“跑偏”的怒火，无底线的“蹭流量”，恶意煽动的“两性对立”……一场突发的社会事件，让我们看到更多的社会问题。碎片化思维，断点式思考，弹幕式从众，娱乐式人生。乌泱泱的情绪囚徒，xxx之众的键盘狂欢，让温和与理性泯没，让情绪与颟顸肆虐。更让包容和博爱沉默。给岁月以文明，给人间以敬畏。我们期待因思考和沉淀而带来的成熟社会。